Tips mencampurkan bahan-bahan PCR pada tube

Ada beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam mencampurkan bahan-bahan PCR, antara lain sebagai berikut: 1. Semua bahan harus diletakan secara terpisah pada dinding tube, kecuali akuades. Hal ini dilakukan untuk menghindari pencampuran bahan sebelum kondisi PCR dioptimasi/ diatur. 2. Bahan-bahan yang terdiri dari DNA template, MgCl2, Taq buffer, dNTP’s, dan Taq polimerase dapat dicampurkan dalam [...]

Isolasi Genom Bakteri Gram Positif

Teknik kerja isolasi genom secara umum terdiri dari tiga tahap, yakni pemanenan pelet, pelisisan sel bakteri untuk  mendapatkan DNA, pemisahan dan pemekatan DNA. Gambar 1 menjelaskan tentang teknik pemanenan pelet. Tahap ini ditujukan untuk mendapatkan pelet yang terpisah dari media pertumbuhannya. Pelet ditimbang pada kisaran tertentu yang disesuaikan dengan konsentrasi lisozim dalam pelisisan sel. Konsentrasi [...]

Peremajaan dan Preparasi Kultur E.coli DH5α Hasil Transformasi untuk isolasi plasmid

Sebelum melakukan isolasi plasmid, ada bahan penting yang harus kita siapkan minimal sehari sebelum kerja. Apakah itu? Yupz, kultur mikroba transforman. Pada teknik transformasi yang pernah saya kerjakan, saya menggunakan E.coli DH5α sebagai sel kompeten dalam kloning. So, yang akan kita siapkan untuk isolasi plasmid ialah kultur hasil transformasi pada E.coli DH5α.  Berikut ini teknis [...]

Isolasi Plasmid pada Transforman yang membawa pG-xynA

Isolasi plasmid diawali dengan screening koloni putih-biru pada media Amp+X-gal+IPTG. Positive clone pG-xynA yang membentuk koloni berwarna putih pada media selektif Amp+X-gal+IPTG direkultur ke media cair Luria Berthani. Setelah inkubasi 1×24 jam pada temperatur ruang, hasil rekultur diambil sebanyak 1,5 ml untuk isolasi plasmid, sedangkan sisanya dibuat stok gliserol. Setelah stok transforman tersedia, disiapkan bahan-bahan [...]